常见问题
这种假阳是由于标记物和包被的蛋白非特异性结合造成的,项目中很常见,可从以下几个方面解决:1.在标记时更换封闭剂成分或是增加用量。2.在不影响试剂灵敏度的情况下,降低标记和包被抗体用量,将整体信号压下来,来消除这种本底信号。3.增加离子浓度,或更换稀释液,改用其他体系进行尝试。
NC膜结合蛋白的星是有限的,超过上限后多余的蛋白没有结合或结合的不牢固,甚至会造成蛋白的堆积,形成空间位阻效应,致使检测时信号会不再增加甚至降低。在调整工艺时,需要根据测试结果选择合适的包被用量。
胶体金或是荧光微球标记后的抗体时间久了出现轻微沉淀很正常,涡旋或是水浴超声沉淀即可消失,如果出现结块沉淀,超声后仍无法去除,则可能存在以下问题:1.标记体系中pH值不合适,导致在标记时就出现聚沉的现象,调整pH。2.封闭剂的成分或用量不合适,导致金颗粒或是微球表面有裸露位点,在储存时出现交联聚集;调整封闭剂用量或更换封闭剂再测试。3.储存液不合适,导致偶联的复合物不稳定出现解离,需重新配制储存液。
优化方向:1.样本来源及赋值数据是否可靠?样本是否新鲜?有条件的话可以用对照试剂盒对样本进行检测,以确定样本的实际数值是否发生改变。⒉样本中存在干扰成分,需筛选合适的阻断剂。
优化方向:1.此项目临床上测定区间多少,如果灵敏度较高可以考虑稀释一定倍数再测定。2线性上不去很有可能是标记和包被抗体的用量不合适,理论上用量不足,但实际应用时并不一定,建议对标记抗体和包被抗体设置梯度进行调试。3.换用小粒径的标记物,小粒径的标记物比表面积大,结合的抗体量更多。4.更换抗体。
优化方向:1.通过换用大粒径标记物,增加标记抗体和包被抗体的用量;如果采用的是竞争法测抗原,可以抗原用来标记,抗体用来包被,用独立质控系统。2.抗体本身性能达不到要求,更换原料。
人工血清建议长期保存在-20度,如多次使用建议按量分装保存。允许少量反复冻融,不建议冻融次数太多。运输条件为冰袋运输。
正常情况下是不会出现沉淀,如出现沉淀,且液体浑浊,考虑是长菌,不能用了。如出现沉淀,液体不浑浊,有可能是成分析出,建议1500转离心5分钟去除沉淀再使用。
S同源试剂是指跟生物试剂头部进口企业Sigm*的同源试剂,且质量标准相同。
人类遗传资源,是指含有人体基因组、基因及其产物的器官、组织、细胞、血液、制备物、重组脱氧核糖核酸(DNA)构建体等遗传材料及相关的信息资料。《人类遗传资源管理暂行办法》第四条规定:国家对重要遗传家系和特定地区遗传资源实行申报登记制度,发现和持有重要遗传家系和特定地区遗传资源的单位或个人,应及时向有关部门报告。未经许可,任何单位和个人不得擅自采集、收集、买卖、出口、出境或以其他形式对外提供。
多克隆抗体在其等电点时的偶联效果较好,这是因为在该 pH 值条件下抗体的结构处于最佳状态,同时在微球表面所占据的面积也最小。
单克隆抗体要比多克隆抗体具有更好的特异性,但是其与微球的结合力要相对弱一些,同时单克隆抗体通常情况下并不能有效的形成免疫复合物,单克隆抗体的疏水性随着抗体的成熟度的不同而有所不同。另外,某些单克隆抗体的等电点比较低,在这种低 pH 条件下胶乳微球会变的不太稳定而容易引起聚集,因此如果想在相同条件下获得很好的偶联效果需要调整相应的缓冲液以及 pH 值等。
1. 保存缓冲液中封闭剂的浓度:当封闭剂的浓度过高时会与抗体发生竞争现象;2. 抗体的偶联效率:在偶联时使用更高浓度的抗体会提高其偶联效率,使封闭剂不容易与微球发生反应;3. 使用 PBS 缓冲液保存,其他缓冲液可能会对溶液的稳定性产生影响。另外需要注意的是随着保存时间的推移溶液中的蛋白会变的更容易吸附到微球的表面,这种抗体活性的丧失可能就是这个原因引起的,因为随着更多蛋白被吸附分子间变的更加的紧密,导致抗体的构象发生改变从而失活,如果确实是这样的话,那么在偶联时应该提高抗体的浓度,使抗体可以更多的偶联到微球表面。
1. EDC 的活性不高,建议检查 EDC 是否已经潮解失效,同时 EDC 和 NHS 都需现配现用;2. 抗体的量不足,建议提高偶联时抗体的浓度;3. 反应缓冲液不适合,建议调整缓冲液的pH值或更换其他缓冲液;4. 反应过程中带入了含有氨基基团的其他蛋白,并与目的抗体发生竞争,建议严格检查所使用的试剂避免微球的非特异性吸附。
1. 微球表面基团含量不高,建议使用表面基团更高的微球;
2. 微球在偶联过程中发生凝集,聚集的微球容易导致非特异性吸附,建议在偶联时使用水浴超声的方式使微球保持悬浮状态;
3. 微球没有封闭完全,建议延长微球封闭的时间或更换其他封闭效果好的封闭剂。
微球在偶联过程中发生凝集主要分为以下几种情况:
1. 当加入 EDC 后发生凝集:建议降低微球在反应体系中的浓度,同时 EDC 需缓慢加入,并在加入之后将微球充分混匀;
2. 当加入抗体后发生凝集:建议尝试使用水浴超声的方式看是否可以使微球重悬,如这种凝集现象是可逆的则继续进行实验;如不能使微球重悬则考虑提高抗体的浓度再实验,或尝试使用其他偶联缓冲体系。
通常情况下微球在 2-8℃ 保存是可以很好的处于悬浮状态,但如果长时间静置的情况下仍会由于重力的作用而发生沉淀现象,在使用前用旋涡振荡以及水浴超声的方式将微球进行重悬。
在pH6.0–9.6的范围内最稳定,不建议低于PH5.5以下,可能会导致量子点QDC-1可能发生不可逆的自聚集。
每个单核的量子点微球表面大约有200-300个官能团,每个微球含有大约500-1000个官能团。由于空间位阻和选择点的原因,并非每个官能团都能发挥左右,该数据仅供感兴趣的客户参考。
在正常的储存过程中,特别是长期静止存放时,可能会观察到量子点微球沉淀于管子底部,但这不影响柏雷丁公司量子点微球的使用,我们建议60-120w超声3min后再进行使用。偶联后的量子点微球存放后若出现沉淀,我们建议60-120w超声1min后再进行使用。
量子点微球结构含有很厚的保护层,比常规的量子点稳定性大幅度提高,在各类常规医学、食品、毒品检测样本中条件下无荧光衰减,客户完全不用担心荧光的衰减问题,这极其有利于后续产品的开发。