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核酸释放剂NF-4,PCR/LAMP冻干专用

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描述
品名 核酸释放剂NF-4,PCR/LAMP冻干专用
类型 通用试剂
形态 液体
产地 中国
保存条件 2-8℃
保质期 18月
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概述

核酸释放剂NF-2/NF-3/NF-4可直接裂解释放样品核酸(DNA/RNA),无需核酸抽提,直接取混合液上清作为模板进行核酸PCR扩增或恒温扩增,且缓冲液对核酸扩增的酶有特异性保护。

核酸释放剂NF-2/NF-3/NF-4适用于所有临床样品(唾液、新鲜全血、血清、肺泡冲洗液、尿液、组织、环境)中细胞(真核、昆虫等)和病原体(病毒、支原体、衣原体、细菌等)采集后的高效灭活。

混合液无需再抽提核酸,可直接取上清作为模板进行PCR或者恒温扩增检测。扩增效率较核酸抽提核酸后核酸扩增效率低2~4个Ct值,释放核酸后进行荧光PCR检测的灵敏度可达5个细胞,约500~1000copies/mL。

可常温长时间保存释放出的病原体核酸,其中常温保存释放出的RNA 7天不降解,常温保存释放出的DNA 6个月不降解。

不同样本的释放步骤

 1.血清、血浆、唾液、稀痰液、尿液、非PBS拭子、非胍盐采集液、细胞培养液等液体样本

       ① 取释放剂 150μL置于1.5mL离心管内,加入液体样本50μL,反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)放置作用≥2min。

       ② 若是新鲜全血,则取10μL全血,加入100μL 释放剂中,反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)放置作用≥2min。

2.EDTA抗凝血样本、完全溶血样本、浓痰液、腹水样本、高浓度PBS溶液样本,

        需要先用DEPC水10倍稀释,再按液体样本:释放剂=1:3进行释放,如取稀释10倍后的样本50μL,再加入释放剂 150μL,混合后室温放置静止作用≥2min。

3.组织固体样本

       取释放剂 300μL置于1.5mL离心管内,再加入黄豆大小充分剪碎的组织样品,反复吹打混匀3-5次,室温(22~25℃)放置作用≥5min。

       注意:亦可加入生理盐水组织匀浆后上清液,按照液体样本进行操作。 

 释放剂NF-3/NF-4冻干型扩增取样

      直接取采样管上清25~50μL作为冻干型RPA、PCR或LAMP扩增模板,进行RPA、PCR或LAMP检测。
      注意:取模板的体积应为冻干体系所需要的总体积,即25μL的冻干反应体系加入采样管上清为23μL,50μL的冻干反应体系加入的采样管上清为45μL(刚好一滴)。

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